ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方法新發(fā)布
更新時間：2021-12-03 點(diǎn)擊次數(shù)：1739次
一直以來ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。上海酶聯(lián)生物現(xiàn)將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給各位同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。
一、選擇試劑
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
1、血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2、加樣后及時放入孵箱。
3、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4、如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5、標(biāo)本較多時，請分批操作。
三、孵育
1、孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*;
2、孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1、貼封片或加蓋；
2、按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
四、洗板
1、采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
2、采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3、反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干；
2、合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
五、顯色
1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
2、加樣時保持顯色劑不外流；
3、A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
七、讀板
如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。上海酶聯(lián)生物擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實(shí)現(xiàn)ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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