很多試劑檢查都涉及到規(guī)范曲線的疑問，ELISA試劑盒規(guī)范曲線做的好與壞會(huì)直接影響到試驗(yàn)的成果，乃至關(guān)系到試驗(yàn)的成敗，那么究竟怎么繪制或規(guī)范曲線呢？
一、做規(guī)范曲線樣品檢查時(shí)有幾個(gè)疑問需要注意
1、樣品的濃度等目標(biāo)是依據(jù)規(guī)范曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做規(guī)范曲線看作是比做正式試驗(yàn)還要主要的一件事，不然后邊的試驗(yàn)成果無從談起。
2、設(shè)置規(guī)范曲線樣品的規(guī)范濃度規(guī)模要有一個(gè)對比大的跨度，而且要能包括你所要檢查試驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在規(guī)范曲線濃度規(guī)模以內(nèi)，人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規(guī)范曲線，盡量要使試驗(yàn)樣品的濃度在中心斜度陡段，即曲線簡直成直線的規(guī)模內(nèi)。
3、選用倍比稀釋法規(guī)范曲線中的規(guī)范樣品濃度，這么就能夠確保規(guī)范樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的違背。
4、檢查規(guī)范樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞加順序進(jìn)行，以削減高濃度對低濃度的影響。
5、規(guī)范曲線的樣品數(shù)通常為7個(gè)點(diǎn)，但少要確保有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的規(guī)范曲線相數(shù)因試驗(yàn)要求不一樣而有所變化，但通常來說，相數(shù)R少要大于0.98，對于有些試驗(yàn)，少要0.99乃至是0.999.
二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合
在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程的擬合，中低濃度部分能夠用直線方程，中心部分可用對數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢查時(shí)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)（能夠是倍比稀釋的，也能夠不是）濃度假設(shè)和相應(yīng)的吸光度（OD）值假設(shè)能夠出現(xiàn)直線當(dāng)然是抱負(fù)的了，這時(shí)能夠經(jīng)過EXELL等利便的取得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。
對于標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合辦法，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反響中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中心一段，而Logistic曲線則對曲線的悉數(shù)都有較好的合用性。在一個(gè)長的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)當(dāng)都能擬合得較為抱負(fù)。假設(shè)用來定量，S形曲線的中心段（較陡處）是對比好的，而兩真?zhèn)€平整部分計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)乃至?xí)艽?。用于免疫檢查的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線"真實(shí)稱為擬合曲線對比適宜。現(xiàn)在國際上盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數(shù)邏輯擬合"，用這種擬合辦法通常能夠?qū)Ρ鹊姆从碀舛群臀舛鹊那€，從而進(jìn)一步對比的取得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時(shí)候能夠有這么抱負(fù)的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值通常是"S"型的曲線，這時(shí)就不能用直線擬合的辦法了，而對擬合辦法進(jìn)行挑選即是必要的了。
樞紐在于你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做到了S形的哪一部分，你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分。當(dāng)然，假設(shè)用于定量，仍是在中心一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。這些辦法當(dāng)然沒有一種辦法能夠通用，但也都能夠用。但并不是說它即是的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它良多生物學(xué)反響都是S形曲線，也都能夠用Logistic曲線擬合。
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